Sephadex LH-20 CAS 9041-37-6

Forma a struktura:
Sephadex gel je kuličkový gel s trojrozměrnou síťovou strukturou. Tato struktura umožňuje dextranovému gelu plně nabobtnat ve vodě a roztocích elektrolytů a vytvořit stabilní gelovou vrstvu. Zrnitost dextranového gelu je také odlišná. Ultrajemný dextranový gel se používá pro sloupcovou chromatografii a chromatografii na tenké{4}}vrstvě vyžadující velmi vysoké rozlišení, zatímco hrubý a střední gel se používá pro preparativní chromatografii, která může dosáhnout vysokých průtoků při nízkém tlaku.

Schopnost bobtnat:
Dextranový gel obsahuje velké množství hydroxylových skupin, které umožňují gelu plně nabobtnat ve vodě a roztocích elektrolytů. Stupeň bobtnání je důležitou fyzikální vlastností dextranového gelu, která určuje separační účinek gelu a hustotu náplně chromatografické kolony. Dextranový gel typu G- má různé stupně zesítění, takže jejich stupně bobtnání a rozsahy separace se liší. Stupeň bobtnání v zásadě není ovlivněn přítomností soli a detergentu, což umožňuje dextranovému gelu udržet si stabilní separační účinek za různých experimentálních podmínek.

Stabilita:

Velikost částic a rozsah separace:
Zrnitost dextranového gelu má významný vliv na jeho separační účinek. Gely s různou velikostí částic jsou vhodné pro různé požadavky na separaci. Ultra jemný dextranový gel je vhodný pro sloupcovou chromatografii a chromatografii na tenké vrstvě vyžadující velmi vysoké rozlišení, zatímco hrubý a střední gel je vhodný pro preparativní chromatografii. Kromě toho se rozsah separace dextranového gelu také mění s jeho stupněm zesítění. Například rozsah separace dextranového gelu G-10 je menší než 700, což je vhodné pro separaci látek s malou molekulou; Sephadex gel G-200 má separační rozsah 5000-600000, který je vhodný pro separaci a čištění makromolekulárních látek.

Instalace a vyvážení sloupu:
Dextranový gel je třeba před použitím ošetřit, včetně bobtnání a naplnění kolony. Bobtnání znamená ponoření suchého gelu do destilované vody na alespoň 24 hodin a za stálého míchání zajistit plné nabobtnání gelu. Při instalaci kolony umístěte nabobtnalý gel do kolony najednou podle požadavků na instalaci kolony, dbejte na údržbu mokré instalace kolony a vyhněte se bublinám nebo poruchám ve koloně. Po instalaci kolony je vyžadováno rovnovážné ošetření, které zahrnuje použití roztoku pufru z horní kolony k vyvážení alespoň 3-5 objemů kolony chromatografické kolony, dokud se základní linie zapisovače neustálí. Účelem rovnováhy je dosáhnout stabilního stavu gelové kolony a zajistit separační efekt.

Separační efekt a velikost vzorku:
Separační účinek dextranového gelu úzce souvisí s jeho nanášeným množstvím. Nadměrná nebo nedostatečná velikost vzorku může ovlivnit účinnost separace. Obecně řečeno, množství nanášeného vzorku gelové filtrace obecně není větší než 5 % objemu lože kolony. Pro počáteční nanesení vzorku se doporučuje řídit objem lože na 1-2 %, který lze upravit v závislosti na situaci separace. Objem vzorku během odsolování může dosáhnout 20 % objemu lože kolony. S požadavky na separaci navíc souvisí i výběr výšky kolony. Pokud je výška kolony příliš vysoká, gelová vrstva způsobí větší zpětný tlak a ovlivní separační efekt. Proto by při výběru výšky kolony měla být stanovena na základě molekulové hmotnosti separované látky a požadavků na separaci.

Eluční metoda a regenerační ošetření:
Existuje mnoho elučních metod pro dextranový gel, včetně eluce bez solanky, eluce pufrem a eluce gradientem. Eluce bez fyziologického roztoku je vhodná pro separaci látek s malou molekulou; Pufrová eluce je vhodná pro separaci a čištění velkomolekulárních látek. Gradientová eluce je proces přidávání gradientových látek, jako je NaCl, do horního pufru kolony a separace látek různých molekulových hmotností změnou iontové síly eluentu. Po určité době používání je třeba dextranový gel regenerovat, aby se odstranily vysrážené a odolné zbytkové proteiny v loži kolony. Metody regeneračního ošetření zahrnují opakované zpětné proplachování vodou a ekvilibraci tlumivým roztokem. U dlouhodobě-konzervovaného gelu je také nutné mytí, dehydratace a sušení.

Doba platnosti a podmínky skladování:
Doba platnosti dextranového gelu se liší podle jeho modelu a podmínek skladování. Obecně řečeno, doba platnosti dextranového gelu se pohybuje od několika měsíců do jednoho roku. Během doby platnosti by měl být gel skladován na suchém, chladném a tmavém místě. Nepoužitý gel lze skladovat při pokojové teplotě; Po použití je potřeba gel před uskladněním řádně ošetřit. Gel lze krátkodobě skladovat čistý a filtrovat do sucha, přidat vhodné množství konzervačního prostředku (jako je 0,02% azid sodný) nebo namočit do 20% etanolu pro kontrolu mikrobiálního růstu. U dlouhodobě-konzervovaného gelu je třeba jej vyjmout z kolony, omýt, dehydratovat, vysušit a uložit do lahví.