Tetramethylbenzidin CAS 54827-17-7

V oblasti klinické in vitro diagnostiky je TMB základním chromogenním substrátem enzymového-imunologického testu (ELISA) a základní funkční složkou velké většiny souprav pro imunotesty. Na scéně sérologické detekce infekčních nemocí se soupravy ELISA pro screening infekčních nemocí, jako je hepatitida BB, protilátky proti hepatitidě C a protilátky proti AIDS založené na chromogenním systému TMB, s extrémně nízkou barvou pozadí a vysokou citlivostí detekce, staly hlavním technickým schématem pro velkoplošný- screening krve na domácích krevních stanicích.

Aplikační data tuzemských krevních stanic ukazují, že minimální limit detekce povrchového antigenu hepatitidy BB může dosáhnout 0,1 IU/ml se soupravou pro krevní screening využívající TMB jako chromogenní substrát.

Ve srovnání s tradičním chromogenním systémem OPD je počet falešně negativních zmeškaných diagnóz snížen o 90 %, čímž se zcela blokuje riziko přenosu infekčních onemocnění souvisejících s transfuzí ze zdroje. Při rutinním ambulantním screeningu infekčních nemocí v terciárních nemocnicích sada TMB kolorimetrický systém ELISA kontroluje mezidávkový rozdíl ve výsledcích detekce v rámci 5 %, zdvojnásobuje rychlost detekce ve srovnání s tradičními metodami a může dokončit vysoce-propustné testování tisíců vzorků denně.

Dokonale splňuje potřeby včasného screeningu infekčních nemocí u-velkých populací. Při klinické detekci hormonů a nádorových markerů je dále zdůrazněna výhoda vysoké citlivosti kolorimetrického systému TMB. Při detekci indikátorů hormonů funkce štítné žlázy, jako jsou TSH, T3, T4 atd., je dynamický lineární rozsah vývoje barvy TMB třikrát širší než u tradičních činidel pro vývoj barvy, která mohou přesně pokrýt celý rozsah koncentrací od zdravých jedinců po pacienty s hypertyreózou a hypotyreózou, čímž se zabrání falešným poplachům způsobeným efektem „háčků“ ve vzorcích s vysokou koncentrací.

Při klinické detekci nádorových markerů může souprava ELISA založená na TMB přesně detekovat nádorové markery, jako jsou CEA a AFP, s koncentrací pouze několik ng/ml v séru, což poskytuje spolehlivé kvantitativní výsledky pro časný screening a monitorování pooperační recidivy rakoviny.

Statistická data z oddělení patologie terciární nemocnice v Číně ukazují, že míra záchytu časných gastrointestinálních nádorů pomocí schématu detekce kolorimetrické kombinace nádorových markerů TMB je o 25 % vyšší než u tradičních metod. V pomocném diagnostickém scénáři rychlé detekce antigenu COVID-19, TMB, jako hlavní složky enzymatického vývoje barvy jiné než metoda koloidního zlata.

Používá se ve vysoce{0}}výkonném systému detekce ELISA pro antigen COVID-19. Citlivost detekce je o jeden řád vyšší než u tradiční metody koloidního zlata, která může dosáhnout pozitivní detekce ve stádiu nízké virové zátěže, což výrazně snižuje míru zmeškané diagnózy u časně infikovaných osob. V podpůrném systému plně automatizovaného chemiluminiscenčního imunotestu může TMB jako vylepšený substrát pro přímou chemiluminiscenci křenovou peroxidázou (HRP) výrazně zlepšit intenzitu a stabilitu luminiscenčního signálu, čtyřnásobně zvýšit poměr signálu -k{8}}šumu chemiluminiscenční detekce a řídit hodnotu CV detekce, plně splňující požadavky detekce vysoké{3% prevence plně automatizované zařízení pro imunoanalýzu.

V oblasti biologického výzkumutetramethylbenzidinje preferovaným chromogenním substrátem pro sekundární protilátky značené HRP v experimentech Western blot a je jedním z nejčastěji používaných chromogenních činidel v laboratořích molekulární biologie. V tradičních experimentech Western Blot může použití TMB chemiluminiscenčního zesíleného kolorimetrického systému detekovat cílové proteiny již na úrovni pg.

Ve srovnání s tradiční kolorimetrickou metodou DAB je citlivost detekce zvýšena o dva řády a lze snadno identifikovat změny exprese proteinů signální dráhy s nízkou četností a transkripčních faktorů v buňkách. Srovnávací experimentální data z biologické laboratoře domácí univerzity ukazují, že při použití optimalizovaného luminiscenčního řešení s vysokou -citlivostí TMB se doba vývoje Western Blot zkrátila z tradičních 30 minut na méně než 10 sekund, s čistými pásy na pozadí a bez nečistot. Lze jasně rozlišit dva podobné proteinové pásy s rozdílem molekulové hmotnosti pouze 1 kDa, což výrazně zlepšuje spolehlivost experimentů s imunoblotováním proteinů.

V experimentálních scénářích imunohistochemie a imunohistochemie může vylepšený systém barvení TMB generovat stabilní modré nerozpustné produkty, přesně lokalizovat polohy exprese cílových proteinů ve tkáňových řezech a buněčných sklíčkách. Ve srovnání s tradičním hnědožlutým barvením DAB tvoří produkty modrého barvení TMB jemné barevné odlišení s modrofialovými jádry barvenými hematoxylinem, bez běžné okrajové difúze a nespecifických problémů s barvením DAB v pozadí -. V experimentech lokalizace neurotransmiterového proteinu v nervové tkáni a interpretace exprese PD-L1 proteinu v nádorové tkáni.

Rozpoznání výsledků barvení TMB je výrazně lepší než tradiční metody barvení, což výzkumníkům pomáhá přesněji pozorovat morfologii subcelulární lokalizace proteinů.

V základním výzkumném scénáři analýzy enzymové aktivity je TMB specifickým substrátem pro stanovení aktivity stopové peroxidázy. Na základě TMB oxidační kolorimetrické spektrofotometrie lze přesně detekovat aktivitu enzymu HRP s koncentrací až 1 ng/ml ve vzorku. Jde o klasickou experimentální metodu pro studium rostlinné peroxidázy a aktivity mikrobiálních antioxidačních enzymů. V předním výzkumu jednomolekulární enzymologie mohou imobilizované molekuly TMB generovat lokalizované barevné precipitáty za katalýzy jediné molekuly enzymu HRP.

Prostorovou distribuci a katalytickou kinetiku jedné molekuly enzymu lze přímo pozorovat pomocí optického mikroskopu, což poskytuje intuitivní pozorovací metodu pro základní výzkum enzymologie jednotlivých-molekul. V detekčním scénáři hybridizace nukleové kyseliny je HRP značena na sondě nukleové kyseliny a cílová sekvence nukleové kyseliny ve vzorku je kvantitativně detekována intenzitou barvy TMB. Bez potřeby složitého fluorescenčního detekčního vybavení lze dokončit levnou-kvalitativní a kvantitativní detekci nukleových kyselin. Je široce používán v genových typizacích a screeningových experimentech geneticky modifikovaných složek v místních vědeckých výzkumných laboratořích.

V oblasti monitorování životního prostředítetramethylbenzidinje široce používán jako vysoce citlivé oxidační kolorimetrické činidlo pro rychlou detekci stopových množství peroxidu vodíku a iontů těžkých kovů ve vodě. Ve scénáři testování bezpečnosti pitné vody dokáže kolorimetrický detekční systém na bázi peroxidázy na bázi TMB rychle detekovat zbytkový peroxid vodíku v pitné vodě v koncentraci 0,01 mg/l, což je hluboko pod limitními požadavky národních norem pro hygienu pitné vody.

Proces detekce nevyžaduje velké přístroje a semikvantitativní posouzení může být dokončeno pozorováním modré hloubky roztoku pouhým okem, což je velmi vhodné pro nouzové monitorování kvality vody v terénu. Ve scénáři detekce iontů těžkých kovů, jako je olovo a rtuť ve vodních útvarech, může funkcionalizovaná nano zlatá simulovaná peroxidáza specificky reagovat na ionty těžkých kovů. Prostřednictvím změny intenzity barvy TMB lze dosáhnout vysoce selektivní vizualizační detekce iontů těžkých kovů s detekčním limitem až 1 nM a náklady na detekci pouhého jednoho procenta tradiční atomové absorpční spektroskopie.

Prokázal extrémně vysokou aplikační hodnotu při screeningu bezpečnosti pitné vody na venkově a rychlém monitorování míst vypouštění průmyslových odpadních vod.

V oblasti testování bezpečnosti potravin je TMB hlavní složkou vyvíjející barvu v různých testovacích proužcích pro rychlou detekci. Ve scénáři enzymové inhibice detekce reziduí pesticidů v potravinách inhibují organofosforové a karbamátové pesticidy aktivitu acetylcholinesterázy. Díky spojení změny barvy TMB katalyzované peroxidázou lze-testování reziduí pesticidů v zelenině rychle dokončit během 10 minut.

Citlivost detekce splňuje limitní požadavky národních norem pro bezpečnost potravin a je nejběžněji používanou metodou rychlé detekce reziduí pesticidů na domácích zemědělských trzích a v místních regulačních odděleních. Při imunochromatografické detekci koloidního zlata znečišťujících látek s malou molekulou, jako je clenbuterol a melamin, nelegálně přidávané do potravin, může enzymaticky katalyzovaná vylepšená kolorimetrická technologie založená na TMB více než 10krát zvýšit citlivost detekce tradičních testovacích proužků koloidního zlata, čímž je dosaženo přesné detekce ilegálních aditiv v nízké koncentraci a výrazně snižuje pravděpodobnost falešně negativních a zmeškaných detekcí.

Ve scénáři rychlé detekce mikrobiální kontaminace v potravinách může použití peroxidu vodíku generovaného během mikrobiálního metabolismu v kombinaci s barevnou reakcí TMB rychle dokončit semikvantitativní screening celkového počtu bakterií v potravinách během 2 hodin. Ve srovnání s tradiční 48hodinovou metodou kultivace na plotnách je doba detekce výrazně zkrácena, což je velmi vhodné pro rychlou kontrolu kvality potravinářských výrobních linek v podnicích na výrobu potravin. Při rychlé detekci aflatoxinu B1 v obilných a olejových potravinách má detekční systém ELISA založený na TMB minimální detekční limit 0,1 μg/kg, což plně splňuje přísné limitní požadavky aflatoxinu v národních potravinách. Náklady na detekci jsou mnohem nižší než náklady na detekční metody hmotnostní spektrometrie s velkými přístroji, takže jsou vhodné pro-rozsáhlé průzkumy bezpečnosti potravin obilí a oleje.