Pentagastrin CAS 5534-95-2

Cílová sekvence: Boc- -Ala-Trp-Met-Asp-Phe-NH₂. Je přijata strategie sekvenční kondenzace AC-na-N terminálu, přičemž L-fenylalaninamid slouží jako C-terminální výchozí materiál.

Selektivní ochrana postranního-řetězce je implementována pro jednotlivé aminokyseliny: -karboxylová skupina kyseliny asparagové je chráněna benzylesterifikací, indolová část tryptofanu podléhá mírnému překrytí a Boc se používá k přechodnému stínění amino-skupin.

Při použití klasických DCC/HOBt jako kondenzačních činidel probíhá kondenzace při nízké teplotě v DMF, se sekvenčním zabudováním Asp, Met a Trp s následnou konečnou konjugací s Boc- -alaninem.

Post-kondenzace, nízko{1}}hydrogenolýza odstraňuje benzylové-ochranné skupiny postranního-řetězce a zbytkové stopy Boc skupin jsou odštěpeny mírným působením TFA.

Koncentrovaný surový produkt se rekrystalizuje ze systému rozpouštědel se směsí acetonitril{0}}s vodou. Díky nízkým kapitálovým investicím do výrobního zařízení byl tento proces široce přijat pro ranou hromadnou výrobu léčiv s celkovým výnosem v rozmezí od 32 % do 38 %. Mezi jeho hlavní nevýhody patří těžkopádná meziizolace a nadměrné vypouštění odpadu, což vede k postupnému nahrazování technologií syntézy v pevné fázi-.

Jako pevný nosič je vybrána 2-chlorotritylchloridová pryskyřice (CTC pryskyřice). Fmoc-Phe-NH2 se nejprve ukotví na matrici pryskyřice a neobsazená místa reaktivní pryskyřice se překryjí methanolem.

S DMF jako reakčním médiem se deprotekce Fmoc dokončí použitím piperidinu a aktivace karboxylu se provede pomocí HBTU/HOBt. Fmoc-Asp(OBzl), Fmoc{2}}Met a Fmoc-Trp jsou postupně propojeny z C-konce směrem k N-konci a v posledním kroku je zaveden terminál Boc- -Ala (Fmoc-free).

Odštěpení z pryskyřice a globální deprotekce postranního-řetězce se provádějí při teplotě okolí pomocí štěpícího koktejlu TFA; pryskyřice se odstraní filtrací a zahuštěný filtrát se podrobí čištění preparativní reverzní -fázovou HPLC na koloně C18 s gradientovou elucí acetonitril-vody, následovanou lyofilizací za účelem získání vysoce -čistoty hromadné farmaceutické suroviny s čistotou 98,5 % nebo rovnou 98,5 % a celkovým výtěžkem mezi 06 %.

Tato metoda se vyznačuje minimálními vedlejšími reakcemi a přímou purifikací, která je v souladu s výrobními specifikacemi pro lékopisné-aktivní farmaceutické složky. V posledních letech optimalizované ekologické-postupy využívající štěpící činidla bez fluoru- drasticky snížily znečištění odpadní{4}}vody a staly se preferovanou výrobní technologií farmaceutických výrobců po celém světě.

V roce 1905 předložil britský fyziolog Edkins hypotézu, že sliznice antrální komory vylučuje gastrin, humorální faktor, který moduluje výdej žaludeční kyseliny prostřednictvím krevního oběhu.

Tato hypotéza, omezená nedostatečnými technologiemi čištění, zůstala kontroverzní a neprokázaná téměř půl století. V roce 1926 čínský fyziolog Lin Kesheng potvrdil existenci gastrointestinálních endokrinních látek pomocí pokusů na zvířatech a doplnil fyziologický rámec hypotézy o gastrinu, ale nativní monomerní gastrin nebyl izolován.

Až v roce 1959 Gregory a Tracy z University of Liverpool ve Velké Británii vyčistili přírodní heptadekapeptidový gastrin G17 z prasečí antrální sliznice pomocí protiproudé distribuce a gelové chromatografie na Sephadexu. Jejich ověření jeho kyselinové-stimulační aktivity položilo pevné chemické a fyziologické základy pro výzkum gastrinu.

V roce 1964 stejný výzkumný tým dokončil úplné sekvenování aminokyselin G17. Segmentová syntéza a screening potvrdily, že C-terminální tetrapeptid Trp-Met{4}}Asp-Phe-NH₂ tvoří farmakoforické jádro, které si plně zachovává nativní receptor gastrinu -vazebnou kapacitu a žaludeční kyselinu-reguluje pouze dlouhodobou aktivitu N{9} kyselin stimulujících aminokyseliny{9} metabolismus in{10}}vivo bez zásadní farmakologické funkce.

Na pozadí naléhavé klinické poptávky po standardizovaných diagnostických reagenciích pro funkci žaludečních kyselin a vysokých nákladů a omezené dodávky extrahovaného přírodního heptadekapeptidu ICI Pharmaceuticals spolupracovala s fyziologickými výzkumníky na zahájení vývojového projektu.

Konjugací Boc-chráněného -alaninu na amino-konec aktivního tetrapeptidu byl zkonstruován stabilnější pentapeptidový derivát, který odolává rychlé enzymatické hydrolýze in vivo.

Úplná chemická syntézapentagastrinbyla provedena Konturekovou výzkumnou skupinou v roce 1967, přičemž in-testy na zvířatech potvrdily její kyselou-sekretagogickou sílu ekvivalentní nativnímu gastrinu. Činidlo získalo marketingové schválení v Evropě ve stejném roce a od té doby se stalo zlatým-standardním činidlem pro testování výstupu žaludeční kyseliny.

Následná schválení byla udělena ve Spojených státech, Japonsku a Číně pro screening gastrinomu a hodnocení funkce parietálních buněk. Od 90. let 20. století se jeho aplikace rozšířila do základního výzkumu jako farmakologická nástrojová sloučenina zacílená na CCK-B receptor a dodnes zůstává klasickou referenční sloučeninou ve farmakologii trávení.